Tema 1.– Historia de la tecnología del DNA recombinante. Aplicaciones.
Tema 2.- Enzimas para la manipulación de ácidos nucleicos: enzimas de restricción. Principales tipos de sistemas de restricción-modificación. Nomenclatura. Metilasas.
Tema 3.- Uso de los enzimas de restricción en la realización de mapas físicos de DNA. Electroforesis en geles de agarosa y poliacrilamida. Geles desnaturalizantes. Electroforesis en campo pulsado (PFGE).
Tema 4.- Enzimas para la manipulación de ácidos nucleicos. Ligasas. Fosfatasa alcalina. Polinucleótido kinasa. Terminal transferasa. DNA y RNA polimerasas. Nucleasas.
Tema 5.- Vectores para la clonación de DNA exógeno. Características de los plásmidos. Tipos de plásmidos. Modo de replicación de plásmidos. Métodos para el aislamiento de plásmidos.
Tema 6.- Introducción de DNA exógeno en bacterias. Transformación, transducción y conjugación. Competencia natural. Competencia artificial. Preparación de células competentes de Escherichia coli usando diferentes técnicas.
Tema 7.- Selección de plásmidos recombinantes. Identificación del gen de interés. Métodos genéticos. Métodos bioquímicos. Métodos inmunológicos. Métodos de hibridación de ácidos nucleicos.
Tema 8.- Vectores de clonación basados en el fago lambda. Vectores de inserción y vectores de sustitución. Encapsidación «in vitro». Selección de fagos recombinantes e identificación de genes de interés.
Tema 9.- Cósmidos. Fósmidos. Fagos filamentosos. Fagémidos. Principales usos de estos vectores de clonación.
Tema 10.- Expresión de genes clonados en Escherichia coli. RNA polimerasa. Factores sigma. Promotores. Sitios de unión a ribosomas. Terminadores.
Tema 11.- Análisis funcional de genes. Factores que afectan la expresión y/ó superexpresión de genes en Escherichia coli.
Tema 12.- Expresión de genes in situ e in vitro: minicélulas, maxicélulas, polimerasa del fago T7, transcripción-traducción in vitro. Vectores de expresión.
Tema 13.- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Aplicaciones en clonación de genes, secuenciación, transcripción reversa por PCR, PCR diagnóstico, medicina forense. Mutagenesis por PCR.
Tema 14.- Técnicas de mutación dirigida de genes distintas a las de PCR
Tema 15.- Epitope tagging. Aplicaciones en purificación de proteínas, localización subcelular de proteínas, interacciones proteicas.
Tema 16. Desarrollo de sistemas de manipulación genética en microorganismos distintos a Escherichia coli.